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Trabajos Finales de Graduación

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Examinando Trabajos Finales de Graduación por Materia "ACTINOPORIN"

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    Efecto de un residuo de prolina en la posición de la estructura primaria de una actjnoporina obtenida de la anémona marina Anthopleura nigrescens (Verril, 1928)
    (Universidad Nacional (Costa Rica), 2019) Luna Miranda, Jairo; Alvarado Mesén, Javier
    Las actinoporinas son toxinas formadoras de poros producidas por las anémonas marinas, rondan los 20 kDa, son básicas, la mayoría carecen de cisteína en su estructura y pertenecen a una familia multigénica por lo que son producidas distintas isoformas por una misma anémona. Para la formación de poros es importante la hélice α cercana al amino terminal, al igual que los primeros 30 residuos cercanos a este sitio. En el año 2012 se reportó por primera vez la presencia de la especie Anthopleura nigrescens en Costa Rica. Empleando técnicas de biología molecular se identificaron alrededor de cuatro isoformas de actinoporina producidas por esta especie y se logró clonar, expresar, purificar y caracterizar a nivel molecular y funcional una de estas isoformas (nigrelisina, Ng). En las isoformas de esta toxina se encontraron alrededor de tres secuencias con un residuo de prolina en la posición dos, captando la atención de los investigadores ya que la prolina es un residuo que por lo general no forma parte de hélices-α debido a que su estructura cíclica es desestabilizadora de este tipo de estructura secundaria, la cual es fundamental para la formación del poro en estas toxinas. Además, en todas las actinoporinas reportadas a la fecha no se había encontrado ninguna con este residuo en su amino terminal. Partiendo de estos antecedentes, para realizar esta investigación de tesis, se procedió a la obtención de un mutante de Ng con un residuo de prolina en la posición dos. Esta toxina mutada se expresó y purificó para determinar el efecto de dicho residuo sobre su actividad biológica mediante ensayos de actividad hemolítica. Acorde a las pruebas realizadas se obtuvo que la mutación conllevó a una disminución de la actividad lítica de Ng, la cual fue evaluada mediante la determinación de su HC50.