A sensitive blotting system for detection of α-fetoprotein variants with monoclonal and polyclonal antibodies

Abstract

Human α-fetoprotein (AFP) variants from cord sera were separated by isoelectric focusing in agarose gels under native conditions, transferred to nitrocellulose paper and detected with polyclonal and monoclonal antibodies (Moabs). Rabbit anti-AFP recognized up to 9 individual electrophoretic variants in the range of pH 4.5 to pH 5.2. The reactivity of 8 Moabs ranged from weak to strong and showed variability in the pattern of AFP bands recognized. Moabs were separated into 3 groups according to the number of bands detected: group 1 detected 6 to 7 bands; group 2 recognized only one band; and group 3 recognized 4 bands. The sensitivity of the system with polyclonal antibodies was 0.15 ng of AFP in complete cord serum and varied between 300 and 0.2 ng with Moabs.Las variantes de la α-fetoproteína (AFP) humana de los sueros del cordón umbilical se separaron mediante enfoque isoeléctrico en geles de agarosa en condiciones nativas, se transfirieron a papel de nitrocelulosa y se detectaron con anticuerpos policlonales y monoclonales (Moabs). Los anti-AFP de conejo reconocieron hasta 9 variantes electroforéticas individuales en el rango de pH 4,5 a pH 5,2. La reactividad de 8 Moabs varió de débil a fuerte y mostró variabilidad en el patrón de bandas de AFP reconocidas. Los Moabs se separaron en 3 grupos según el número de bandas detectadas: el grupo 1 detectó de 6 a 7 bandas; el grupo 2 reconoció sólo una banda; y el grupo 3 reconoció 4 bandas. La sensibilidad del sistema con anticuerpos policlonales fue de 0,15 ng de AFP en el suero completo del cordón umbilical y varió entre 300 y 0,2 ng con los Moabs.