An electrophoretic study on phospholipase A2 isoenzymes in the venoms of Central American crotaline snakes

Abstract

The number and isoelectric points of phospholipase A2 isoenzymes were studied in the venoms of 12 Central American crotaline snakes of the genera Bothrops, Crotalus, Lachesis and Agkistrodon. The study was carried out by using a methodology based on electrophoretic separation of venoms, transfer to nitrocellulose and detection of activity of the bands by an indirect hemolytic assay in agarose-erythrocyte-egg yolk gels. All venoms tested had indirect hemolytic activity, although they varied in the number and isoelectric point of their phospholipases A2. Most venoms had predominantly acidic isoenzymes, with the exception of A. bilineatus which had mainly basic isoenzymes and B. schlegelii which had both acidic and basic isoenzymes. Analysis of interindividual variability in B. asper venom demonstrated that two phospholipase A2 isoenzymes are present in some venoms but absent in others. Polyvalent antivenom was effective in neutralizing phospholipase A2 activity of the 12 venoms tested, when venoms and antivenom were incubated in the fluid phase. This work demonstrates a conspicuous interspecific variability in the number and isoelectric points of phospholipases A2 present in Central American crotaline snake venoms.

Se estudió el número y los puntos isoeléctricos de las isoenzimas de la fosfolipasa A2 en los venenos de 12 serpientes crotalinas centroamericanas de los géneros Bothrops, Crotalus, Lachesis y Agkistrodon. El estudio se llevó a cabo mediante una metodología basada en la separación electroforética de los venenos, la transferencia a nitrocelulosa y la detección de la actividad de las bandas mediante un ensayo hemolítico indirecto en geles de agarosa-eritrocitos-yema de huevo. Todos los venenos analizados tenían actividad hemolítica indirecta, aunque variaban en el número y punto isoeléctrico de sus fosfolipasas A2. La mayoría de los venenos tenían isoenzimas predominantemente ácidas, con la excepción de A. bilineatus que tenía principalmente isoenzimas básicas y B. schlegelii que tenía tanto isoenzimas ácidas como básicas. El análisis de la variabilidad interindividual del veneno de B. asper demostró que dos isoenzimas de la fosfolipasa A2 están presentes en algunos venenos pero ausentes en otros. El antiveneno polivalente fue eficaz para neutralizar la actividad de la fosfolipasa A2 de los 12 venenos probados, cuando los venenos y el antiveneno se incubaron en la fase fluida. Este trabajo demuestra una llamativa variabilidad interespecífica en el número y los puntos isoeléctricos de las fosfolipasas A2 presentes en los venenos de las serpientes crotalinas centroamericanas.