Purification of intracellular bacteria: isolation of viable Brucella abortus from host cells

Abstract

The pathogenesis of brucellosis depends on the ability of bacteria from the genus Brucella to invade and replicate within animal cells. To understand the molecular pathways used by Brucella spp. to reach its intracellular niche, robust and reproducible bacteria purifi cation protocols that provide enough material for biochemical and molecular biology studies are essential. Here, we describe a detailed methodology designed to extract and purify viable brucellae from mammalian host cells at different time periods of their intracellular cycle. The yield of proteins and nucleic acids is suffi cient to perform immunochemical analysis, genetic studies, transcriptomics, and proteomics among others.La patogénesis de la brucelosis depende de la capacidad de las bacterias del género Brucella para invadir y se replican dentro de las células animales. Para entender las vías moleculares utilizadas por Brucella spp. para alcanzar su nicho intracelular, protocolos de purificación de bacterias robustos y reproducibles que proporcionan suficiente material para los estudios bioquímicos y de biología molecular son esenciales. Aquí, describimos una metodología detallada diseñado para extraer y purificar brucelas viables de células huésped de mamíferos en diferentes períodos de tiempo de su ciclo intracelular. El rendimiento de las proteínas y los ácidos nucleicos es suficiente para realizar un análisis inmunoquímico, estudios genéticos, transcriptómicos y proteómicos entre otros.