Molecular detection of Plasmodium malariae/Plasmodium brasilianum in non-human primates in captivity in Costa Rica

Abstract

One hundred and fifty-two blood samples of non-human primates of thirteen rescue centers in Costa Rica were analyzed to determine the presence of species of Plasmodium using thick blood smears, semi-nested multiplex polymerase chain reaction (SnM-PCR) for species differentiation, cloning and sequencing for confirmation. Using thick blood smears, two samples were determined to contain the Plasmodium malariae parasite, with SnM-PCR, a total of five (3.3%) samples were positive to P. malariae, cloning and sequencing confirmed both smear samples as P. malariae. One sample amplified a larger and conserved region of 18S rDNA for the genus Plasmodium and sequencing confirmed the results obtained microscopically and through SnM-PCR tests. Sequencing and construction of a phylogenetic tree of this sample revealed that the P. malariae/P. brasilianum parasite (GenBank KU999995) found in a howler monkey (Alouatta palliata) is identical to that recently reported in humans in Costa Rica. The SnM-PCR detected P. malariae/P. brasilianum parasite in different non-human primate species in captivity and in various regions of the southern Atlantic and Pacific coast of Costa Rica. The similarity of the sequences of parasites found in humans and a monkey suggests that monkeys may be acting as reservoirs of P.malariae/P. brasilianum, for which reason it is important, to include them in control and eradication programs.

Se analizaron ciento cincuenta y dos muestras de sangre de primates no humanos de trece centros de rescate en Costa Rica para determinar la presencia de especies de Plasmodium utilizando frotis de sangre espesa, reacción en cadena de polimerasa multiplex semianidada (SnM-PCR) para la diferenciación de especies , clonación y secuenciación para confirmación. Utilizando frotis de sangre espesa, se determinó que dos muestras contenían el parásito Plasmodium malariae, con SnM-PCR, un total de cinco (3,3%) muestras fueron positivas para P. malariae, la clonación y la secuenciación confirmaron ambas muestras de frotis como P. malariae. Una muestra amplificó una región más grande y conservada de ADNr 18S para el género Plasmodium y la secuenciación confirmó los resultados obtenidos microscópicamente y mediante pruebas SnM-PCR. La secuenciación y la construcción de un árbol filogenético de esta muestra revelaron que P. malariae / P. El parásito brasilianum (GenBank KU999995) encontrado en un mono aullador (Alouatta palliata) es idéntico al reportado recientemente en humanos en Costa Rica. La SnM-PCR detectó P. malariae / P. brasilianum parásito en diferentes especies de primates no humanos en cautiverio y en varias regiones del sur del Atlántico y la costa del Pacífico de Costa Rica. La similitud de las secuencias de parásitos que se encuentran en humanos y un mono sugiere que los monos pueden estar actuando como reservorios de P. malariae / P. brasilianum, por lo que es importante incluirlos en los programas de control y erradicación.