Morphological and molecular characterization of the metacercaria of Paragonimus caliensis, as a separate species from P. mexicanus in Costa Rica

Abstract

The trematode Paragonimus mexicanus is the etiological agent of paragonimiasis, a food-borne zoonotic disease in Latin America. This species, as well as Paragonimus caliensis, have been reported from Costa Rica, but it is not known if the two are synonymous. Two types of Paragonimus metacercariae from freshwater pseudothelphusid crabs from several localities in Costa Rica were recognized by light microscopy. Morphologically, these corresponded to descriptions of P. mexicanus and P. caliensis. Metacercariae of the former species lacked a membrane or cyst and their bodies were yellow in color. Those of P. caliensis were contained in a transparent thin cyst and were pink in color. Morphotypes of metacercariae were determined using scanning electron microscopy (SEM). Based on the number and distribution of papillae in the ventral sucker, three morphotypes were found for P. mexicanus and two for P. caliensis. Analysis of DNA sequences (nuclear ribosomal 28S and ITS2 genes, and partial mitochondrial cox1 gene) confirmed the presence of P. mexicanus and provided the first molecular data for P. caliensis. The two species are phylogenetically distinct from each other and distant from the Asian species. The confirmation of P. caliensis as a separate species from P. mexicanus raises several questions about the ecology, biological diversity, and epidemiology of the genus Paragonimus in Costa Rica. © 2017 The Authors. Published by Elsevier Ireland Ltd. This is an open access article under the CC BY-NC-ND licenseEl trematodo Paragonimus mexicanus es el agente etiológico de la paragonimiasis, una enfermedad zoonótica transmitida por los alimentos en América Latina. Esta especie, así como Paragonimus caliensis, han sido reportadas desde Costa Rica, pero no se sabe si ambas son sinónimos. Mediante microscopía óptica se reconocieron dos tipos de Paragonimus metacercariae de cangrejos pseudotelofusidos de agua dulce de varias localidades de Costa Rica. Morfológicamente, estos correspondían a descripciones de P. mexicanus y P. caliensis. Las metacercarias de las especies anteriores carecían de una membrana o quiste y sus cuerpos eran de color amarillo. Los de P. caliensis estaban contenidos en un quiste delgado transparente y eran de color rosa. Los morfotipos de metacercarias se determinaron mediante microscopía electrónica de barrido (SEM). Según el número y la distribución de las papilas en la ventosa ventral, se encontraron tres morfotipos para P. mexicanus y dos para P. caliensis. El análisis de las secuencias de ADN (genes ribosómicos nucleares 28S e ITS2, y el gen mitocondrial cox1 parcial) confirmó la presencia de P. mexicanus y proporcionó los primeros datos moleculares para P. caliensis. Las dos especies son filogenéticamente distintas entre sí y distantes de las especies asiáticas. La confirmación de P. caliensis como una especie separada de P. mexicanus plantea varias preguntas sobre la ecología, la diversidad biológica y la epidemiología del género Paragonimus en Costa Rica.