A new method for the detection of phospholipase A2 variants: Identification of isozymes in the venoms of newborn and adult Bothrops asper (terciopelo) snakes

Abstract

E. Moreno, A. Alape, M. Sánchez and J. M. Gutiérrez. A new method for the detection of phospholipase A2 variants: identification of isozymes in the venoms of newborn and adult Bothrops asper (terciopelo) snakes. Toxicon 26, 363 - 371, 1988. - A new method for the identification of phospholipase A2 isozymes in snake venoms is described. The technique is based on the separation of the venom components by isoelectric focusing in agarose gels, transfer of the protein bands by diffusion onto nitrocellulose paper and detection of the phospholipolytic activity of the enzymes by a hemolytic assay either in agarose gels or by benzidine reaction on a solid matrix. Striking differences in the electrophoretic patterns of the phospholipase A2 isozymes between the Atlantic and Pacific venoms and between the newborn and adult venoms from Bothrops asper specimens were observed. The method allowed the detection of 9 different phospholipase A2 isozymes in the venom of adult Atlantic, 7 isozymes in the venom of adult Pacific, and 2 - 3 isozymes in the venoms of newborn specimens. Horse polyvalent antivenom varied in its capacity to neutralize the phospholipolytic activity of the different isozymes in the same venom and among different venoms.E. Moreno, A. Alape, M. Sánchez y J. M. Gutiérrez. Un nuevo método para la detección de variantes de la fosfolipasa A2: identificación de isozimas en los venenos de serpientes Bothrops asper (terciopelo) recién nacidas y adultas. Toxicon 26, 363 - 371, 1988. - Se describe un nuevo método para la identificación de las isozimas de la fosfolipasa A2 en los venenos de serpientes. La técnica se basa en la separación de los componentes del veneno por enfoque isoeléctrico en geles de agarosa, la transferencia de las bandas de proteínas por difusión en papel de nitrocelulosa y la detección de la actividad fosfolipolítica de las enzimas por un ensayo hemolítico en geles de agarosa o por reacción de bencidina en una matriz sólida. Se observaron notables diferencias en los patrones electroforéticos de las isozimas de la fosfolipasa A2 entre los venenos del Atlántico y del Pacífico y entre los venenos de recién nacidos y adultos de especímenes de Bothrops asper. El método permitió detectar 9 isozimas de fosfolipasa A2 diferentes en el veneno de adultos del Atlántico, 7 isozimas en el veneno de adultos del Pacífico, y 2 - 3 isozimas en los venenos de especímenes recién nacidos. El antiveneno polivalente de caballo varió en su capacidad de neutralizar la actividad fosfolipolítica de las diferentes isozimas en el mismo veneno y entre diferentes venenos.