Desarrollo de una técnica inmunoenzimática para el diagnóstico de anticuerpos contra Paragonimus mexicanus

Abstract

La paragonimiasis es una zoonosis parasitaria transmitida por alimentos que se considera desatendida y subdiagnosticada en Costa Rica. Debido a que no se encuentra disponible una prueba diagnóstica inmunológica, el objetivo del presente estudio fue producir y caracterizar diferentes proteínas recombinantes de Paragonimus westermani para posteriormente utilizarlas en pruebas inmunoenzimáticas. Inicialmente se expresaron y purificaron las cisteína proteasas recombinantes de P. westermani CP4, CP7 y CP9, las cuales se evaluaron mediante la técnica de inmunoblot con sueros de ratas positivas y negativas a Paragonimus mexicanus y con sueros humanos positivos a P. westermani, P. mexicanus, fascioliasis, esquistosomiasis, clonorchiasis, cisticercosis, toxocariasis, leishmaniosis, esparganosis, amebiasis y sueros humanos negativos a parasitosis. La cisteína proteasa CP7 fue el antígeno que mostró más especificidad, puesto que detectó los sueros positivos a Paragonimus spp., pero no reaccionó con los sueros negativos, y solamente presentó reacción cruzada con sueros de pacientes con fascioliasis, toxocariasis y esparganosis; mientras que los otros dos antígenos presentaron más reacciones cruzadas con otras parasitosis. Seguidamente, se utilizó el antígeno CP7 de P. westermani en la estandarización de la técnica inmunoenzimática de ELISA para detectar anticuerpos contra Paragonimus spp. Una vez estandarizada la técnica se analizaron sueros humanos positivos a P. westermani, sueros humanos positivos a P. mexicanus y sueros humanos infectados con otras helmintiasis, y sueros de pacientes sin parasitosis. La sensibilidad y especificidad del ELISA estandarizado fue de 71.4 % y 100.0%, respectivamente, y el valor predictivo positivo y negativo de 100.0% y 77.8 %. Este representa el primer reporte de la estandarización de un ELISA para el diagnóstico de Paragonimus spp. en Costa Rica y Centroamérica. Se recomienda evaluar el desempeño de un antígeno recombinante de P. mexicanus para utilizar en este ELISA.Paragonimiasis is a foodborne parasitic zoonosis that is considered neglected and underdiagnosed in Costa Rica. considered neglected and underdiagnosed in Costa Rica. Because an immunological diagnostic test is not immunological diagnostic test is not available, the objective of this study was to produce and characterize different the aim of the present study was to produce and characterize different recombinant proteins from Paragonimus westermani for subsequent use in enzyme-linked immunosorbent assays. enzyme-linked immunosorbent assays. Initially, recombinant cysteine proteases from P. westermani were expressed and purified. CP4, CP7 and CP9 were initially expressed and purified, which were evaluated by immunoblot immunoblot technique with sera from Paragonimus mexicanus-positive and -negative rats, and with sera from Paragonimus mexicanus and with human sera positive for P. westermani, P. mexicanus, fascioliasis, schistosomiasis, clonorchiasis, cysticercosis, toxocariasis, leishmaniasis, sparganosis, amebiasis and parasitosis-negative human sera. The cysteine protease CP7 was the antigen that showed the highest specificity, since it detected the Paragonimus spp. positive sera, but did not react with the negative sera, and only cross-reacted negative sera, and only cross-reacted with sera from patients with fascioliasis, toxococcus spp. fascioliasis, toxocariasis and sparganosis; while the other two antigens showed more cross-reactions with other cross-reacted more with other parasitosis. Next, we used the CP7 antigen of P. CP7 antigen of P. westermani was then used in the standardization of the enzyme-linked immunosorbent ELISA enzyme-linked immunosorbent assay technique to detect antibodies against Paragonimus spp. Once the technique was standardized, P. westermani positive human sera, P. westermani, P. mexicanus-positive human sera, and human sera infected with other helminthiases, and with other helminthiases, and sera from patients without parasitosis. The sensitivity and specificity of the standardized ELISA was 71.4% and 100.0%, respectively, and the positive and negative predictive value of 100.0%. positive and negative predictive value of 100.0% and 77.8%. This represents the first report on the standardization of an ELISA for the diagnosis of Paragonimus spp. in Costa Rica and Central America. in Costa Rica and Central America. It is recommended to evaluate the performance of a recombinant P. mexicanus recombinant antigen for use in this ELISA.