Validación de una técnica para la determinación de toxinas paralizantes en moluscos bivalvos de Costa Rica mediante cromatografía líquida acoplada a reactor post columna con detector de fluorescencia

Abstract

Se implementaron las condiciones cromatográficas y de extracción para la validación de una técnica para la determinación de doce toxinas paralizantes (PSP), incluyendo los grupos STX’s (saxitoxinas), GTX’s (gonyautoxinas) y C’s (N-sulfocarbamoil gonyautoxinas) para moluscos bivalvos. Para la metodología de extracción se evaluó y modificó la propuesta de Rourke et al. [1], utilizando una extracción ácida en HCl 0,1 M y ácido tricloroacético 30 m/v en la etapa de purificación. Posteriormente se evaluaron y modificaron los métodos cromatográficos propuestos por Rourke et al. [1] y Franco y Fernández [2]. La validación se realizó para el primer método citado [1], en el cual se establece un programa en gradiente para la separación de las toxinas STX’s y GTX’s, y un método isocrático para la separación de C’s. La validación del método determinó un coeficiente de correlación (R) 0.995-1.000, un coeficiente de determinación (R2) 0.989-1.000 y un rango lineal de 53.7-926.6 μg STX diHCl equivalentes/100 g. La sensibilidad se determinó en 4.32-60.32 LU (μmol/L)-1, el porcentaje de recuperación entre 58-115%, el coeficiente de variación entre 2-17% para la repetibilidad instrumental y 2-16% para repetibilidad metodológica. La sensibilidad (límites de detección (LODs)): 1.1-8.5 μg/100g; límites de cuantificación (LOQs)): 1.60-12.6 μg/100g. La aplicación de esta metodología demostró un buen desempeño y capacidad para la determinación simultánea de toxinas PSP en moluscos bivalvos.

Chromatographic and extraction conditions were implemented and validated for the determination of twelve paralytic toxins (PSP) in bivalves, including STX’s (saxitoxins), GTX’s (gonyautoxins) and C’s (N-sulfocarbamoyl gonyautoxins). The extraction method of Rourke et al. [1] was tested and modified using an acid extraction in 0.1 M HCl and 30 m/v trichloroacetic acid in the purification step. The chromatographic methods proposed by Rourke et al. [1] and Franco and Fernández [2] were evaluated. The validation was performed for the first method mentioned [1]; a gradient program is established for the separation of STX’s and GTX’s toxins, and an isocratic method for the separation of C’s. The established method was further validated by determining the correlation coefficient (R) (0.995-1.000), coefficient of determination (R2) (0.989-1.000), linear range (53.7-926.6 μg STX diHCl equivalents/100 g), sensitivity (4.32-60.32 LU (μmol/L)-1), recovery percentage (58-115%), coefficient of variation (2-17%) for instrumental repeatability and (2-16%) for methodological repeatability, sensitivity (limits of detection (LODs)): 1.1-8.5 μg/100g and limits of quantification (LOQs)): 1.60-12.6 μg/100g. The application of this method proved good performance and capability for simultaneous determination of PSP toxins in bivalve molluscs.