Facultad de Ciencias de la Saludhttp://hdl.handle.net/11056/140512024-03-29T12:59:02Z2024-03-29T12:59:02ZCaracterización de la región promotora del gen omp25 de Brucella abortus.Castillo Zeledón, Amandahttp://hdl.handle.net/11056/274882024-03-22T18:05:29Z2010-01-01T00:00:00ZCaracterización de la región promotora del gen omp25 de Brucella abortus.
Castillo Zeledón, Amanda
La brucelosis es una enfermedad zoonótica, producida por bacterias del género Brucella.
Muchos de los mecanismos que utiliza esta bacteria para invadir y replicarse en las células no
se comprenden. Sin embargo, las propiedades de la membrana externa y el sistema de
regulación de expresión de genes BvrR/BvrS están ligados a su virulencia. La Omp25 es una
de las proteínas de membrana externa más estudiadas. Aunque su función es desconocida, su
expresión es regulada por el sistema de regulación BvrR/BvrS que es importante para la
virulencia. El objetivo de este trabajo fue la caracterización de la región promotora del gen
omp25, como prototipo de secuencias promotoras que constituirían un regulón de virulencia
bajo el control de BvrR/BvrS. Para ello, se realizaron fusiones transcripcionales de la región
corriente arriba del gen omp25 con el gen reportero lacZ carente de promotor. Una primera
fusión contenía 392 pb (pares de bases) corriente arriba de omp25, asimismo, se clonaron dos
fragmentos más cortos que contenían 262 pb y 151 pb de la misma región. La expresión de las
fusiones transcripcionales en la cepa silvestre Brucella abortus 2308 fue evaluada durante las
distintas fases del crecimiento bacteriano. Estos ensayos demostraron la presencia de actividad
promotora en dos de los constructos y una notoria disminución de más del 90% en la
expresión del gen con el constructo que contenía 151 pb, delimitando la región que posee las
secuencias para la activación del promotor. Por lo tanto, existe una actividad promotora basal
en las 151 bp corriente arriba de omp25, que es positivamente regulada por secuencias que se
encuentran luego de las 152 bp corriente arriba de omp25. Esta caracterización sirve como
modelo para realizar estudios comparativos con regiones reguladoras de otros genes
importantes para Brucella, crear herramientas que permitan controlar la expresión de éstos y
por lo tanto, combatir a este patógeno.; Brucellosis is a zoonotic disease caused by intracellular facultative cocobacili bacteria
belonging to the Brucella genus. The mechanisms used to invade and replicate within cells are
not well understood. However, its virulence is linked to its outer membrane properties as well
as to secretion and gene regulation systems. Omp25 is an outer membrane protein with an
unknown function whose gene expression is under the control of the BvrR/BvrS two
component regulatory system, relevant for virulence. The aim of this work was to characterize
the omp25 promoter region as a prototype of promoter sequences that might constitute a
virulence regulon under the BvrR/BvrS control. To accomplish this, transcriptional fusions of
the omp25 upstream region to the lacZ promotorless reporter gene were created. The first
fusion had 392 bp upstream omp25. Likewise, two more fragments were cloned containing
262 bp and 151 bp of the same region. The expression of the transcriptional fusions in the wild
type Brucella abortus 2308 strain was evaluated during its growth phase. These assays proved
the presence of a growth phase dependent promoter activity in two of the constructions and a
more than 90% reduction in gene expression of the construct containing the 151 bp fragment,
outlining the region that has promoter activity. Therefore, a basal promoter activity is located
within 151 bp upstream of omp25. This activity is positively regulated by further upstream
sequences. This characterization could be used as a model for comparative studies with other
regulatory regions in other important Brucella genes, and in this way create better tools to
control their expression and therefore this pathogen.
2010-01-01T00:00:00ZCaracterización fenotípica de aislamientos de Brucella sp. obtenidos a partir de murciélagos (Desmodus rotundus) en Piedras Blancas, Puntarenas, Costa RicaHidalgo Montealegre, Danielahttp://hdl.handle.net/11056/274862024-03-22T17:30:30Z2024-01-01T00:00:00ZCaracterización fenotípica de aislamientos de Brucella sp. obtenidos a partir de murciélagos (Desmodus rotundus) en Piedras Blancas, Puntarenas, Costa Rica
Hidalgo Montealegre, Daniela
Brucella es un género de bacterias responsable de causar brucelosis, una
enfermedad zoonótica distribuida en el mundo. Las brucelas causan problemas
reproductivos en animales domésticos y silvestres e infecciones debilitantes en los seres
humanos. En el año 2023 se describió una nueva la especie llamada Brucella nosferati,
cuyo nombre es reminiscente de la leyenda del vampiro Nosferatu de Transilvania,
aislada de murciélagos vampiro de la especie Desmodus rotundus (Hernández-Mora et
al. 2023). Estos murciélagos mostraron lesiones en la placenta, colonización bacteriana
de las glándulas salivales y mamaria, orquiepididimitis, otros órganos, muerte fetal y
momificaciones (Hernández-Mora et al. 2023). Ante este hallazgo se planteó la
necesidad de realizar una caracterización bacteriológica y fenotípica de los aislamientos
de B. nosferati. Para ello, se emplearon pruebas bioquímicas y bacteriológicas validadas
para el género Brucella, y métodos de identificación automatizados como el VITEK® 2.
Todos los aislamientos evaluados fueron positivos a la prueba de oxidasa, no utilizaron
citrato ni requirieron de CO2 para su crecimiento. Además, presentaron variabilidad en la
capacidad de reducir nitratos, presentaron una actividad de ureasa muy rápida, fueron
capaces de producir H2S, crecieron en presencia de tionina y fucsina, y se clasificaron
como bacterias lisas. Con respecto a los análisis del VITEK® 2, todos los aislamientos
resultaron bioquímicamente idénticos entre sí. Al comparar los resultados bioquímicos
con las cepas de referencia B. abortus 2308W, Brucella nosferati BCCN 84.3 y B. canis
BcanCR12, los porcentajes de similitud fueron de 82.97%, 91.49% y 93.62%
respectivamente. Adicionalmente, se evaluaron las curvas crecimiento bacteriano en
medios de cultivo líquido. Tanto Brucella nosferati BCCN 84.3 como B. nosferati
alcanzaron la fase estacionaria después de 48 horas y presentaron una fase exponencial
más prolongada, alcanzando mayor densidad bacteriana en comparación con B. abortus.
Se determinó que tanto Brucella nosferati BCCN 84.3 como Brucella nosferati
presentaron un alto nivel de resistencia a polimixina B y a la acción bactericida del suero.
Esta caracterización sienta las bases para estudios comparativos sobre la genética y
virulencia de esta nueva especie de Brucella.; Brucella is a genus of bacteria responsible for causing brucellosis, a worldwide
zoonotic disease. This illness leads to reproductive issues in domesticated animals and
wildlife, and imposes a debilitating infection on humans. In 2023, a new species named
Brucella nosferati was described, with a name reminiscent of the Transylvanian vampire
legend Nosferatu, isolated from vampire bats of the species Desmodus rotundus
(Hernández-Mora et al. 2023). These bats exhibited placental lesions, bacterial
colonization of salivary and mammary glands, orchiepididymitis, other organs,
mummifications and fetal death (Hernández-Mora et al. 2023). This finding prompted the
need for a bacteriological and phenotypic characterization of B. nosferati isolates. To
achieve this, validated biochemical and bacteriological tests for the Brucella genus were
employed, along with automated identification methods such as VITEK® 2. All evaluated
isolates tested positive for the oxidase test, did not utilize citrate, and did not require CO2
for growth. Moreover, they showed variability in nitrate reduction capability, exhibited very
rapid urease activity, produced H2S, grew in the presence of thionine and fuchsin, and
were classified as smooth bacteria. In terms of VITEK® 2 analysis, all isolates were found
to be biochemically identical to each other. When comparing the biochemical results with
reference strains B. abortus 2308W, Brucella nosferati BCCN 84.3, and B. canis
BcanCR12, the similarity percentages were 82.97%, 91.49%, and 93.62%, respectively.
Additionally, bacterial growth curves in broth culture media were evaluated. Both Brucella
nosferati BCCN 84.3 and B. nosferati reached the stationary phase after 48 hours and
exhibited a more extended exponential phase, attaining a higher bacterial density
compared to B. abortus. It was determined that both Brucella nosferati BCCN 84.3 and
Brucella nosferati displayed a high level of resistance to polymyxin B and resistance to
the bactericidal action of serum. This characterization lays the groundwork for
comparative studies on the genetics and virulence of this new Brucella species.
2024-01-01T00:00:00ZPasantía en salud de hato y control de la producción en fincas de lechería especializada de Poasito (Alajuela), y en Vara Blanca y Los Cartagos (Heredia) con énfasis en reproducción y diagnóstico laboratorial de enfermedades.Quirós Oviedo, Ricardo Andréshttp://hdl.handle.net/11056/274832024-03-22T17:16:07Z2024-01-01T00:00:00ZPasantía en salud de hato y control de la producción en fincas de lechería especializada de Poasito (Alajuela), y en Vara Blanca y Los Cartagos (Heredia) con énfasis en reproducción y diagnóstico laboratorial de enfermedades.
Quirós Oviedo, Ricardo Andrés
En el periodo comprendido entre el 30 de enero y el 30 de mayo del 2023, bajo
la tutela del Dr. Frank Hueckmann Voss, se realizó una pasantía en ocho fincas de
lechería especializada en la zona de Poasito de Alajuela, Los Cartagos y Vara Blanca
de Heredia. El objetivo de la pasantía consistió en fortalecer las habilidades en las
áreas funcionales más importantes a la hora de implementar programas de salud de
hato.
Se trabajó un total de 62 días, equivalente a 449 horas, en las que se llevaron
a cabo 3929 actividades, las cuales se distribuyeron de la siguiente manera: 60% en
la finca A, 17% en la finca B, 14% en la finca C, cuatro % en la finca D, dos % en la
finca E, dos % en la finca F, uno % en la finca G y uno % en la finca H. Estas tareas
se distribuyeron en tratamientos profilácticos n=1476 (38%), exámenes reproductivos
n=1105 (28%), toma de muestras n=517 (13%), tratamientos generales (estomatitis
vesicular, mastitis, retenciones placentarias, enteritis) n=481 (12%), actividades de
rutina (recorte funcional, secado, descorne, inseminación, detección de celos) n=250
(seis %) y cirugías y necropsias, tratamientos hormonales, análisis de protocolos de
salud de hato, así como exámenes clínicos con un n<35 (menos uno %).
En el proceso descrito, se dio énfasis a la toma de muestras para lograr
diagnósticos de laboratorio para agentes etiológicos, que permitieron identificar
distintas áreas de mejora y plantear metas para lograrlo, por lo que la discusión de
resultados se enriquece en esta área. Una vez finalizada la pasantía se concluye que
la clínica y los exámenes de laboratorio complementarios, son importantes siempre
que exista un enfoque epidemiológico detrás, puesto que permiten encontrar la raíz
de los problemas y solucionarlos, mediante medidas de manejo, que incluyen una
buena alimentación, correcto manejo en el periodo de transición, adecuadas
condiciones corporales, desarrollo apropiado de terneras, vacunaciones y medicina
profiláctica oportuna.; In the period between January 30 and May 30, 2023, under the tutorship of Dr.
Frank Hueckmann Voss, an internship was carried out in 8 specialized dairy farms
located in Poasito of Alajuela, Los Cartagos and Vara Blanca of Heredia, all advised
by Dr. Hueckmann. The objective of the internship was to strengthen skills in the most
important functional areas when implementing herd health programs.
A total of 62 days were worked, equivalent to 449 hours, which were distributed
as follows: 60% on farm A, 17% on farm B, 14% on farm C, 4% on farm D, 2% on farm
E, 2% on farm F, 1% on farm G and 1% on farm H. During the mentioned time, 3929
activities were carried out on the farms. The tasks were distributed in prophylactic
treatments n=1476 (38%), reproductive examinations n=1105 (28%), sampling n=517
(13%), general treatments (vesicular stomatitis, mastitis, retained placenta, enteritis) n
=481 (12%), routine activities (functional trimming, drying, dehorning, insemination,
heat detection) n=250 (6%) and surgeries and necropsies, hormonal treatments,
analysis of herd health protocols, as well as examinations clinicians with n<35 (less
1%). During the internship, the emphasis was placed on taking samples to achieve
etiological laboratory diagnoses and through these findings, identify areas for
improvement and set goals to achieve it, in such a way that the discussion of results is
enriched in this area.
After having completed the internship, it can be concluded that the internship
and complementary laboratory tests are important whenever there is an
epidemiological approach behind, to find the root of the problems and solve them
through management measures, which include a good diet, correct management in
the transition period, adequate body conditions, proper development of calves,
vaccinations and timely prophylactic medicine.
2024-01-01T00:00:00ZPasantía en medicina interna, cirugía, reproducción y medicina preventiva en bovinos y porcinos, mediante giras de campo en fincas especializadas.Zúñiga Salguero, Alexanderhttp://hdl.handle.net/11056/274812024-03-22T16:56:27Z2023-01-01T00:00:00ZPasantía en medicina interna, cirugía, reproducción y medicina preventiva en bovinos y porcinos, mediante giras de campo en fincas especializadas.
Zúñiga Salguero, Alexander
Se realizó una pasantía clínica en bovinos y porcinos, mediante giras de campo en fincas
especializadas en las localidades de: Poás, Orotina, San Rafael y Barva de Heredia, Sardinal,
Chomes, Jacó, Esterillos y Guápiles en Costa Rica durante el año 2022. El objetivo de la pasantía
consistió en fortalecer y reforzar los conocimientos adquiridos en la carrera de medicina
veterinaria, aplicando la teoría en la práctica, en las áreas de medicina interna, reproducción,
medicina preventiva y procedimientos quirúrgicos, en hatos bovinos y porcinos.
Se llevaron a cabo un total de 357 horas de trabajo, en las cuales se atendieron aproximadamente
1200 cerdos y 1900 bovinos, a los cuales se les realizaron procedimientos y tratamientos según
lo requiriera el caso. Entre ellos los más frecuentes resultaron los diagnósticos de patologías
reproductivas, digestivas y respiratorias, así como es tratamiento de las afectaciones
diagnosticas a estos sistemas. Además, se presentan dos casos clínicos: Bovino con dislocación
de abomaso y Abordaje médico y análisis de un brote de diarrea en lechones.
La pasantía permitió fortalecer y desarrollar destrezas en el abordaje de casos en las áreas de
cirugía, medicina interna y reproducción en hatos bovinos y porcinos. Asimismo, se adquirió
experiencia en medicina comunitaria, no solamente evaluar, diagnosticar y tratar a las especies,
sino también al interactuar con propietarios por medio de las visitas a las fincas.|; A clinical internship in cattle and pigs was carried out through field trips to specialized farms in
the towns of: Póas, Orotina, San Rafael and Barva in Heredia, Sardinal, Chomes, Jacó, Esterillos
and Guápiles in Costa Rica during 2022. The objective of the internship was to strengthen and
reinforce the knowledge acquired in the veterinary medicine career by applying theory in
practice, in the areas of internal medicine, reproduction, preventive medicine and surgical
procedures, in cattle and pig herds.
A total of 357 hours of work were done, in which approximately 1200 pigs and 1900 cattle were
attended, to which procedures and treatments were performed as required by case. Among them,
the most frequent were the diagnoses of reproductive, digestive, and respiratory pathologies, as
well as the treatment of diagnostic affectations to these systems. In addition, two clinical cases
were presented: Treatment of a group of piglets due to diarrhea & dislocation of the abomasum
in a bovine.
The internship strengthens and develop skills in dealing with internal medicine, surgery and
reproduction cases in bovine and swine herds. In addition, to gain experience in community
engagement, interacting with owners and workers through of farm visits was a fundamental key.
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