Validación de una técnica para la determinación de toxinas paralizantes en moluscos bivalvos de Costa Rica mediante cromatografía líquida acoplada a reactor post columna con detector de fluorescencia
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Date
2018Author
Rojas-Arrieta, Karla
Salazar-Chacón, Yajaira
Rojas-Martínez, José Luis
Borbón, Henry
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Se implementaron las condiciones cromatográficas y de extracción para la validación de una
técnica para la determinación de doce toxinas paralizantes (PSP), incluyendo los grupos STX’s
(saxitoxinas), GTX’s (gonyautoxinas) y C’s (N-sulfocarbamoil gonyautoxinas) para moluscos
bivalvos. Para la metodología de extracción se evaluó y modificó la propuesta de Rourke et
al. [1], utilizando una extracción ácida en HCl 0,1 M y ácido tricloroacético 30 m/v en la etapa
de purificación. Posteriormente se evaluaron y modificaron los métodos cromatográficos
propuestos por Rourke et al. [1] y Franco y Fernández [2]. La validación se realizó para el
primer método citado [1], en el cual se establece un programa en gradiente para la separación
de las toxinas STX’s y GTX’s, y un método isocrático para la separación de C’s. La validación
del método determinó un coeficiente de correlación (R) 0.995-1.000, un coeficiente de
determinación (R2) 0.989-1.000 y un rango lineal de 53.7-926.6 μg STX diHCl equivalentes/100
g. La sensibilidad se determinó en 4.32-60.32 LU (μmol/L)-1, el porcentaje de recuperación entre
58-115%, el coeficiente de variación entre 2-17% para la repetibilidad instrumental y 2-16%
para repetibilidad metodológica. La sensibilidad (límites de detección (LODs)): 1.1-8.5 μg/100g;
límites de cuantificación (LOQs)): 1.60-12.6 μg/100g. La aplicación de esta metodología
demostró un buen desempeño y capacidad para la determinación simultánea de toxinas PSP
en moluscos bivalvos. Chromatographic and extraction conditions were implemented and validated for the determination
of twelve paralytic toxins (PSP) in bivalves, including STX’s (saxitoxins), GTX’s (gonyautoxins)
and C’s (N-sulfocarbamoyl gonyautoxins). The extraction method of Rourke et al. [1] was tested
and modified using an acid extraction in 0.1 M HCl and 30 m/v trichloroacetic acid in the
purification step. The chromatographic methods proposed by Rourke et al. [1] and Franco and
Fernández [2] were evaluated. The validation was performed for the first method mentioned [1];
a gradient program is established for the separation of STX’s and GTX’s toxins, and an isocratic
method for the separation of C’s. The established method was further validated by determining
the correlation coefficient (R) (0.995-1.000), coefficient of determination (R2) (0.989-1.000),
linear range (53.7-926.6 μg STX diHCl equivalents/100 g), sensitivity (4.32-60.32 LU (μmol/L)-1),
recovery percentage (58-115%), coefficient of variation (2-17%) for instrumental repeatability
and (2-16%) for methodological repeatability, sensitivity (limits of detection (LODs)): 1.1-8.5
μg/100g and limits of quantification (LOQs)): 1.60-12.6 μg/100g. The application of this method
proved good performance and capability for simultaneous determination of PSP toxins in bivalve
molluscs.
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