Optimización de técnicas de PCR para la detección de Salmonella enterica (serotipo Gallinarum) en aves de corral de Costa Rica
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Date
2022-02-21Author
Leza Leza, Makayla Tatiana
Víquez‑Ruíz, Eunice
Barquero Calvo, Elías
Sancho Blanco, Carolina
Umaña Castro, Rodolfo
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Introducción: La tifosis aviar y la pulorosis,
enfermedades ocasionadas por Salmonella enterica
subsp. enterica (serotipo Gallinarum, biotipos Gallinarum
y Pullorum), son responsables de una elevada mortalidad
en aves de corral y generan grandes pérdidas económicas.
Objetivo: Optimizar técnicas moleculares, como la PCR
punto final y la PCR de tiempo real (qPCR), para detectar
tifosis aviar y pulorosis. Métodos: Se emplearon cepas
bacterianas control, aislamientos y tejidos de aves de
infectadas con Salmonella Gallinarum para estandarizar la
detección con ambas técnicas. Resultados: Para la PCR de
punto final se obtuvo una repetibilidad, especificidad y
sensibilidad del 100%, y un valor Kappa de 0,98 para la
reproducibilidad; para qPCR una eficiencia del 103% y
variación menor al 6% en repetibilidad y reproducibilidad.
El límite de detección de ADN genómico fue de 6,4 pg/μL
y el del número de células viables de 3x102 UFC/mL para
la PCR punto final, y de 10 copias de ADN por reacción
para la qPCR. Confirmamos la identidad de S. Gallinarum.
Y se redujo el tiempo de detección a unas 48 horas,
Conclusión: Logramos optimizar una técnica molecular
para detección rápida, confiable y sensible de Salmonella
Gallinarum/Pullorum, la cual reduce el tiempo de espera
para tomar acción en casos de sospecha clínica y posibles
brotes. "Optimization of PCR techniques optimization
for detection of Salmonella enterica (serotype:
Gallinarum) in Costa Rican poultry". Introduction: Avian
typhoid and pullorosis, diseases caused by Salmonella
enterica subsp. enterica (Gallinarum serotype, Gallinarum
and Pullorum biotypes), cause high mortality in poultry
and generate large economic losses. Objective: To
optimize molecular techniques, such as endpoint PCR and
real-time PCR (qPCR), to detect avian typhoid and
pullorosis. Methods: We used control bacterial strains,
isolates and tissues from birds infected with Salmonella
Gallinarum to standardize detection with both
techniques. Results: For the endpoint PCR, we obtained
100% repeatability, specificity and sensitivity, and a Kappa
value of 0.98 for reproducibility; for qPCR, 103% efficiency
with a variation under 6% in repeatability and
reproducibility. The detection limit for genomic DNA was
6.4 pg/μL and the limit for the number of viable cells was
3x102 CFU/mL for endpoint PCR, and 10 DNA copies per
reaction for qPCR. We also confirmed the identity of S.
Gallinarum, and was reduced. We reduced the detection
time to about 48 hours. Conclusion: We optimized a
molecular technique for rapid, reliable and sensitive
detection of Salmonella Gallinarum/Pullorum, which
reduces the waiting time to take action in cases of clinical
suspicion and possible outbreaks.
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