Estandarización de un protocolo de caracterización molecular para la identificación de especie de cepas terrestres de bacterias del género Brucella
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Date
2011-10-03Author
MUNOZ VARGAS, LOHENDY
BARQUERO-CALVO, ELIAS
Moreno, Edgardo
Guzman-Verri, Caterina
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La brucelosis es la enfermedad zoonótica más extendida en el mundo que afecta diversos animales, incluyendo especies domésticas y de vida silvestre. Es causada por una
bacteria perteneciente al género Brucella, el cual incluye nueve especies distintas e infectantes de mamíferos terrestres y marinos. Cada especie de Brucella presenta variaciones en la secuencia de ADN que afectan a los nucleótidos en una posición específica del
genoma. A estas variaciones se les llama polimorfismo. El polimorfismo de las especies
de Brucella localizado en los genes que codifican para las proteínas glk, omp25ytrpE, se
utilizó para desarrollar un ensayo múltiple basado en la extensión de cebadores, el cual
permite identificar un aislamiento como miembro de una de las nueve especies reconocidas. Los métodos tradicionales para la identificación de Brucella a nivel de especie
consumen mucho tiempo y ponen en riesgo al personal laboratorial. Es por ello que la
finalidad de este trabajo es evitar la ambigüedad, agilizar el procedimiento, disminuir el
tiempo de respuesta y generar una herramienta laboratorial más efectiva para mejorar
la vigilancia epidemiológica, el diagnóstico y el abordaje de la brucelosis en Costa Rica.
El siguiente trabajo presenta la estandarización del protocolo para la extracción de ADN
de Brucella, así como de una serie de amplificaciones de fragmentos de genes de interés
por medio de la reacción en cadena de la polimerasa (PCR) y la estandarización de la
reacción de extensión de cebadores. Brucellosis is the most widespread zoonotic disease worldwide that affects various
animals, including domestic species and wildlife. It is caused by bacteria belonging
to the genus Brucella, which includes nine different species and infective terrestrial
and marine mammals. Each species of Brucella has variations in DNA sequence
involving nucleotides in a specific position in the genome. These variations are called
polymorphisms The polymorphism of Brucella species located in the genes coding for
proteins glk, omp25, and trpE was used to develop a multiplex assay based on primer
extension, with which it can identify an isolate as a member of nine recognized species.
Traditional methods for identification of Brucella at the species level, time consuming
and endanger laboratory staff. That is why the aim of this work is to avoid ambiguity,
to streamline the procedure, reduce the response time and generate a more effective
laboratory tool for improving epidemiological surveillance, diagnosis and approach of
brucellosis in Costa Rica. This paper presents the standardization of the protocol for DNA
extraction of Brucella, the standardization of a series of amplifications of fragments of
genes of interest through the chain reaction (PCR) and standardization of the extension
reaction primers. Brucelose é a doença zoonótica mais distribuída por todo o mundo e que afeta várias
espécies animais incluindo espécies domésticas e selvagens. É causada por uma bactéria
pertencente ao género Brucella que inclui nove espécies diferentes e é infectante para
mamíferos terrestres e marinhos. Cada espécie de Brucella tem variações na sequência de
DNA envolvendo os nucleótidos de uma posição especifica do genoma. Estas variações
são chamadas polimorfismos. O polimorfismo das espécies de Brucella localizado no código genético para proteínas glk, omp25 e trpE foi utilizado para desenvolver um
ensaio múltiplo baseado na primeira extensão, com a qual se pode identificar e isolar
como membro de uma das 9 espécies. Os métodos tradicionais para identificação de
Brucella ao nível da espécie, consomem muito tempo e põe em risco o pessoal de
laboratório. É por isso que o objectivo deste trabalho é evitar a ambiguidade, agilizar
o procedimento, reduzir o tempo de resposta e gerar uma ferramenta laboratorial
mais efectiva para melhorar a vigilância epidemiológica, diagnostico e aproximação
à brucelose na Costa Rica. Este artigo, apresenta a estandardização do protocolo para
extracção de DNA de Brucella, estandardização de uma série de amplificações de
fragementos genéticos de interesse através da reacção de polimerase em cadeia (PCR)
e estandardização da reacção dos primers de extensão.
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